Técnicas em Biologia Molecular: Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)

A reação em cadeia da polimerase (PCR) tem como sua maior aplicação a possibilidade de amplificar um segmento de DNA, produzindo milhões de cópias do segmento selecionado. A clonagem gênica tem objetivo de introduzir um gene selecionado dentro de bactérias idênticas entre si, e essa técnica requer a presença de um vetor de clonagem capaz de amplificar um fragmento de DNA neles clonados. O gene E do vírus da dengue (DENV) é o mais utilizado para estudos moleculares devido à importância da proteína E. O presente estudo trata-se de um Trabalho de Conclusão de Curso (TCC) e teve como objetivo estabelecer técnicas de amplificação do gene E do DENV-2 e DENV-4. A molécula de DNA foi obtida da FIOCRUZ em Recife; os primers foram selecionados de modo a englobar o gene E. A separação dos fragmentos foi feita por eletroforese em gel de agarose. A amplificação por PCR foi satisfatoriamente estabelecida para o gene E. Uma vez determinadas, estas técnicas são imprescindíveis nas etapas de obtenção de DNA recombinante no processo de clonagem e expressão da proteína E da dengue.